C2株贾第虫醛糖还原酶的原核表达与生物信息学分析

• 作者: 李冀 杨炘谕 沈海娥 王沂 王洋 王皓钰 田喜凤 蒋子禹 邱明娟
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫 醛糖还原酶 原核表达 亲和层析 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 539-544
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.06.0086

摘要

[目的]克隆、原核表达、纯化C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)醛糖还原酶(Aldose reductase,AR)基因,并进行生物信息学分析.[方法]从C2株贾第虫基因组DNA中克隆贾第虫AR编码区,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),酶切和测序进行验证,并进行生物信息学分析;将构建成功的重组质粒pET-28a(+)-AR转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并进行诱导表达,SDS-PAGE及Western Blot验证表达效果;镍亲和层析纯化AR蛋白,SDS-PAGE观察纯化效果.[结果]成功克隆了C2株贾第虫AR蛋白编码区并构建了原核表达载体,SDS-PAGE及Western Blot显示,AR表达载体转化的大肠杆菌经诱导可表达出相对分子量约37.2kDa的目的蛋白,与预期一致;重组蛋白通过亲和层析获得了高效纯化;生物信息学分析显示贾第虫AR蛋白主要二级结构为无规则卷曲,整体为一个NADPH依赖的氧化还原酶结构域.AR蛋白在真核生物中相当保守,贾第虫AR蛋白在进化上相对独立.[结论]证实了贾第虫AR蛋白的存在并明确了其结构和进化上的特征,为贾第虫AR抗体的制备和功能的研究提供了基础.