白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测

• 作者: 何培民 张春莉 张正阳 施定基 贾晓会 贾睿
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 对虾 白斑综合征病毒(WSSV) VP28 大肠杆菌 鱼腥藻7120 定量免疫印迹
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 183-188
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 4331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12024/jsou.20160401739

摘要

VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白.将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、Xho Ⅰ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到pET-28a(+)表达载体上.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒双酶切、测序鉴定后成功地构建了VP28基因原核表达载体pET-28a-VP28.转化菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示含有与预期大小一致的约30 ku蛋白带,主要以包涵体形式表达.采用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,获得了纯度为95％的大肠杆菌重组蛋白VP28.该纯化蛋白作为绝对定量Western的标准品,梯度稀释建立标准曲线,以定量检测转基因鱼腥藻7120中的VP28绝对表达量.实验结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白VP28与鱼腥藻7120中表达的VP28分子量基本相同,纯化后的大肠杆菌重组蛋白梯度稀释作为绝对定量Western标准曲线,计算出转基因鱼腥藻7120在培养第17天时,VP28的表达量最大,为5.14 μg/mL,占转基因鱼腥藻7120总蛋白浓度的1.45％.这不仅对转基因鱼腥藻的高效培养具有重要意义,也为日后确定投喂对虾口服疫苗有效剂量防治白斑综合征奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施定基	中国科学院植物研究所	66	1027	18.0	28.0
2	贾睿	上海海洋大学水产与生命学院	30	91	5.0	8.0
3	贾晓会	上海海洋大学水产与生命学院	6	28	3.0	5.0
4	张正阳	上海海洋大学水产与生命学院	1	2	1.0	1.0