猪O型口蹄疫病毒细菌样颗粒疫苗的制备与免疫原性鉴定

• 作者: 乔绪稳 于晓明 侯立婷 侯继波 李槿年 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 口蹄疫病毒 VP1蛋白 可溶性表达 细菌样颗粒疫苗 免疫原性
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 217-227
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.160245

摘要

验证基于革兰氏阳性增强基质(Gram-positive enhancer matrix,GEM)展示口蹄疫病毒细菌样颗粒(Bacteria-like particles,BLP)疫苗的可行性.按照大肠杆菌偏好性密码子优化合成基于猪口蹄疫病毒Mya98株序列的3种抗原基因设计,并将其插入到含有锚钩蛋白基因的原核表达载体pQZ-PA,鉴定阳性后转入Escherichia coli BL21,进行诱导表达.利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因表达及产物的可溶性进行分析.利用GEM颗粒纯化目的蛋白,制备细菌样颗粒疫苗抗原;利用BCA试剂盒测定重组蛋白的浓度,将重组蛋白与白油佐剂乳化,制备疫苗,免疫5周龄小鼠,同时设商品化多肽苗对照与空白对照,免疫后不同时间采集试验小鼠血清,利用口蹄疫病毒多肽ELISA抗体检测试剂盒和O型口蹄疫抗体液相阻断酶联免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒检测免疫小鼠血清的抗体水平;利用噻唑蓝比色法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定淋巴细胞增殖情况;利用荧光定量PCR方法检测相关细胞因子表达,评价细胞免疫水平.SDS-PAGE结果表明,设计在大肠杆菌中的3种口蹄疫病毒抗原基因均以可溶形式获得高效表达;Western blotting结果显示,表达的重组蛋白能够与口蹄疫病毒阳性血清发生反应,利用GEM颗粒能够实现重组蛋白的一步离心纯化,制备BLP疫苗抗原;免疫试验结果表明,设计的重组抗原B (T1BT2) 4B不但能够刺激免疫小鼠产生更高水平的多肽特异性ELISA抗体与口蹄疫特异性液相阻断抗体,而且产生了更高水平的脾淋巴细胞增殖及Thl型的细胞因子分泌.初步实验结果表明,本研究制备的BLP疫苗GEM-B (T 1BT2) 4B具有良好的免疫原性,为研究口蹄疫病毒基因工程亚单位疫苗开辟了一条新的思路.