食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶的克隆、表达及酶学性质

• 作者: 倪辉 朱艳冰 殷勤 肖安风 蔡慧农
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 食鹿角菜交替假单胞菌 芳香基硫酸酯酶 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 20-27
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2017.03.002

摘要

目的:在大肠杆菌中高效表达食鹿角菜交替假单胞菌芳香基硫酸酯酶基因,并对重组酶的酶学性质进行研究,为开发酶法去除琼脂硫酸酯的技术奠定基础.方法:通过PCR克隆芳香基硫酸酯酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,并对重组酶的酶学性质进行研究.结果:从食鹿角菜交替假单胞菌克隆得到芳香基硫酸酯酶基因(987 bp),预测编码328个氨基酸残基.将该基因在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达和纯化,SDS-PAGE分析显示,重组酶的分子质量为35.1 ku.以对硝基苯硫酸钾(p-NPS)为底物,酶的比活力达26.7 U/mg,最适反应温度50℃和最适反应pH 7.0,Km为0.65 mmol/L,Vmax为19.99 μmol/(mg·min).除了SDS,重组酶对其他测试的抑制剂和去垢剂具有一定的抗性.重组芳香基硫酸酯酶和龙须菜粗多糖在40℃反应2h,酶解产物凝胶强度提高2.1倍,可脱除多糖84.9％的硫酸基团.结论:重组芳香基硫酸酯酶能有效脱除龙须菜粗多糖的硫酸基团,为开发环保、高效的酶法琼脂生产技术奠定基础.