结合利用pGAPZαA和pPICZαA构建目的蛋白的多拷贝载体并在毕赤酵母中表达

• 作者: 冯菲 刁文涛 周伏忠 宁萌 王雪妍 陈晓飞
• 来源期刊: 河南科学
• 关键词: pGAPZαA pPICZαA 多拷贝 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学与农业科学
• 页码范围: 83-87
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

结合利用载体pGAPZαA和pPICZαA构建目的蛋白的可线性化多拷贝表达载体,并转化毕赤酵母表达目的蛋白.首先将目的蛋白基因构建到组成型表达载体pGAPZαA中,然后依据载体自身特性,用同尾酶Bgl Ⅱ和BamH Ⅰ切取其表达盒并连接到甲醇诱导型载体pPICZαA中的BamH Ⅰ位点处,经多次重复后获得目的蛋白多拷贝表达载体,线性化后电转化毕赤酵母表达目的蛋白.灵芝免疫调节蛋白LZ8是一个已成功在毕赤酵母中表达的蛋白,作为检验该方法的样本其基因被首先构建到载体pGAPZαA中得到质粒pGAPZαA-LZ8,切取其表达盒构建到载体pPICZαA中,经过4次重复得到了多拷贝表达载体pPICZαA-[GAPZαA-LZ8]4,然后利用pPICZαA特有的限制性内切酶位点SacⅠ进行线性化,最终电转化到毕赤酵母GS115中进行组成型表达蛋白LZ8,其表达量达到pGAPZαA-LZ8转化菌株表达量的2～3倍.经检验,结合利用载体pGAPZαA和pPICZαA可以构建目的蛋白的多拷贝表达载体,并且可以对载体进行线性化而不影响转化酵母时的转化效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁萌		11	32	3.0	5.0
2	周伏忠		40	194	7.0	12.0
4	陈晓飞		19	40	4.0	5.0
7	王雪妍		8	12	3.0	3.0
8	冯菲		17	30	4.0	4.0
9	刁文涛		9	11	3.0	3.0