AKAP1过表达腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的功能初步研究

• 作者: 刘峰舟 吴有盛 孙夏承 季乐乐 尹纯 李飞 杨芳
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: A激酶锚定蛋白1 心肌功能 活性氧簇 腺病毒载体构建
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 405-410
• 页数: 6页
• 分类号: Q343.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13191/j.chj.2017.0103

摘要

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建A激酶锚定蛋白(AKAP)l重组腺病毒载体,初步探索AKAP1在心肌细胞中的功能.方法 以正常小鼠心肌细胞cDNA为模板,利用PCR获取AKAP1基因,构建腺病毒重组质粒pAdEasy-AKAP1.用293A细胞,包装重组腺病毒Ad-AKAP1颗粒,并用荧光蛋白标记法测定其滴度.用Western blot检测重组腺病毒感染原代小鼠心肌细胞和糖尿病心肌病细胞模型后AKAP1、Caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测原代小鼠心肌细胞内ROS生成水平及AKAP1对高糖状态下心肌细胞凋亡的影响.结果 构建了携带AKAP1基因的过表达腺病毒载体,并获得5×1010 pfu/ml的高滴度重组腺病毒.重组腺病毒可感染原代心肌细胞和糖尿病心肌病模型H9c2细胞并介导AKAP1过表达(P＜0.05).与阴性对照组相比,过表达AKAP1可抑制高糖高脂状态下心肌细胞内ROS的生成(P＜0.05),可抑制高糖状态下心肌细胞的凋亡和Caspase-3活化(P＜0.01).结论 过表达AKAP1对高糖高脂状态下的心肌细胞具有潜在保护作用,对心肌功能发挥具有重要作用.其机制可能与AKAP1抑制心肌细胞内ROS生成、抑制Caspase-3活化、抑制细胞凋亡有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨芳		40	212	9.0	12.0
2	吴有盛		14	46	4.0	6.0
3	李飞		62	236	7.0	11.0
4	季乐乐		6	34	4.0	5.0
5	刘峰舟		4	12	1.0	3.0
6	孙夏承		3	5	1.0	2.0
7	尹纯		2	1	1.0	1.0