L-脯氨酸-4-羟化酶的异源表达和合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的条件优化

• 作者: 周海岩 李会帅 柳志强 王培
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: L-脯氨酸-4-羟化酶 反式-4-羟基-L-脯氨酸 双加氧酶 生物合成 生物催化 优化
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 1-9
• 页数: 9页
• 字数: 6597字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2017.01.001

摘要

L-脯氨酸-4-羟化酶(L-Proline-4-hydroxylase,P4H)是依赖α-酮戊二酸(α-KG)和Fe2+的双加氧酶成员之一,在反式4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-hydroxy-L-proline,t-4Hyp)等重要手性化合物的生物合成中发挥关键作用.本研究构建了来源于Bradyrhizobium japonicum USDA 6的P4H重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-28b-p4hBJ,SDS-PAGE和酶活检测结果表明,该菌株具有表达可溶性P4H和催化合成t-4Hyp的能力.通过优化,确定了该重组菌全细胞催化合成t-4Hyp较优的反应体系和条件:10 mLpH 6.5 80 mmol/LMES缓冲液、9 mmol/L L-Pro,6 mmol/L L-抗坏血酸,6 mmol/L α-KG,0.8 mmol/L FeS04·7H2O,反应温度为35℃;在20 g/L湿细胞的催化反应中,t-4Hyp的合成量达到34.86 mg/L,比优化前(17.53 mg/L)提高了98.86％.该工作为进一步利用P4H生物催化法合成t-Hyp奠定了一定的技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王培		2	11	2.0	2.0
3	周海岩		5	14	3.0	3.0
7	李会帅		1	3	1.0	1.0