稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定

• 作者: 王晓冬 贾永前 陈姣
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 急性髓细胞白血病(AML) Fms样酪氨酸激酶-3 内部串联重复 细胞株
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 727-732
• 页数: 6页
• 分类号: R965
• 字数: 3318字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20170615

摘要

构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型.筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长.然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞.收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况.207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长.双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证.慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增.同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况.通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾永前	四川大学华西医院血液科	86	374	9.0	15.0
2	王晓冬	四川省人民医院血液科	43	144	6.0	10.0
3	陈姣	四川省人民医院血液科	19	38	3.0	3.0