牛樟芝鲨烯合酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 华梅 原晓龙 杨宇明 王娟 王毅 赵能 陈剑
• 来源期刊: 福建师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛樟芝 鲨烯合酶 基因克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 页码范围: 50-59
• 页数: 10页
• 分类号: Q939.92
• 语种: 中文
• DOI: 10.12046/j.issn.1000-5277.2017.06.009

摘要

为了解牛樟芝三萜类生物合成、调控机理,以多孔菌科真菌茯苓(Wolfiporia cocos,AFR13032.1)的SQS基因为模板对牛樟芝基因组数据进行本地Blast,分离获得牛樟芝鲨烯合酶(AcSQS 基因.以该序列为模板设计特异引物AcSQSF0和AcSQSR0,通过PCR扩增得到AcSQS eDNA全长,并对其进行生物信息学分析,检测不同碳氮源添加物的培养基上该基因的表达水平.结果显示:克隆得到的基因为牛樟芝鲨烯合酶(AcSQS),该基因含4个外显子,3个内含子,外显子拼接总长1 803 bp,编码600个氨基酸;其蛋白序列的1 ～17位为信号肽位点,具两段跨膜结构,可能定位于内质网;位于该蛋白189～ 204位的CHYVAGLVGEGLTRL和225 ～238位的MGLMLQKTNIIRDY的保守基序为鲨烯合酶识别位点,DTIEDD和D (Y/F) RED为FPP绑定位点;蛋白网络分析显示其位于三萜类化合物的代谢网络中;聚类分析显示AcSQS蛋白和茯苓、硫磺多孔菌、拟蜡菌、灵芝、云芝等的SQS蛋白聚为一支;不同碳氮源添加物培养基上的表达分析显示:果糖诱导该基因表达的能力最强,而不同氮源添加物诱导该基因表达的能力无明显差异.