从异常核型人胚胎干细胞中筛选不同X染色体失活状态的亚系

• 作者: 卢光琇 林戈 邓磊玉
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人胚胎干细胞 异常核型 表观遗传 单细胞克隆 XIST
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 156-161
• 页数: 6页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 4755字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2017.02.011

摘要

目的:从异常核型人胚胎干细胞系中分离两种不同X染色体失活(XCI)状态的细胞,建立亚系,并进行对其XCI状态特征和多能性标记进行鉴定.方法:G显带鉴定人胚胎干细胞系chHESC-3早晚期代数细胞的核型,H3K27me3免疫荧光染色鉴定早晚期chHESC-3表观遗传差异,RT-PCR 检测早晚期chHESC-3中XIST基因的表达.利用单细胞克隆的培养分选亚系,H3K27me3、RNA polymeraseⅡ以及DAPI三种标记的共染后每种表观标记各选两株进行RT-PCR,检测两种亚系中XIST基因的表达.并对这四株细胞进行干细胞标记鉴定.结果:G显带结果证明早期chHESC-3为正常核型,晚期代数核型为异常核型,牵涉到8条染色体的复杂结构变异.H3K27me3免疫荧光染色证明异常核型chHESC-3中有部分细胞出现了H3K27me3凝集点,而正常核型细胞中未发现.正常核型细胞(chHESC-3N)没有XIST基因表达,异常核型细胞(chHESC-3C)中有表达.在RNA polymeraseⅡ着色缺口中发现H3K27me3凝集点的细胞亚株XIST基因表达阳性,polymeraseⅡ着色缺口中未发现H3K27me3凝集点的细胞亚株XIST基因表达阴性,XIST阳性和阴性细胞各选两株进行多能性标记免疫荧光染色均为阳性.结论:成功从异常核型人胚胎干细胞系中分离两种不同XCI状态的细胞并建立亚系,两种表观类型的亚系均保持多能性标记并能在长期培养中保持各自特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林戈	中南大学基础医学院	51	203	8.0	12.0
3	邓磊玉	中南大学基础医学院	3	3	1.0	1.0
6	卢光琇		3	6	2.0	2.0