盘状结构域受体1过表达慢病毒载体的构建及稳定过表达人胃腺癌BGC823细胞系的建立

• 作者: 尚琪 张德奎 张翠霞 李佩容 温萌 谢瑞霞 郭丽芳
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌 盘状结构域受体1 慢病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: R73|R735.2
• 字数: 3275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13885/j.issn.1000-2812.2017.01.002

摘要

目的 构建盘状结构域受体1 (DDR1)基因的慢病毒载体,建立稳定过表达DDR1的人胃腺癌BGC823细胞系.方法 实时荧光定量PCR扩增DDR1目的基因,双酶切目的基因并插入LV5载体,构建LV5-DDR1慢病毒表达载体;随后转入人胚肾细胞293FT中进行慢病毒包装,用获得的慢病毒毒液感染人胃腺癌BGC823细胞系并通过嘌呤霉素筛选阳性表达细胞;根据转染情况,将细胞分为BGC823组(空白BGC823细胞)、BGC-NC组(转染空载慢病毒LV5的BGC823细胞)、BGC-DDR1组(转染过表达LV5-DDR1的BGC823细胞),分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析DDR1 mRNA和蛋白的表达.结果 经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了LV5-DDR1慢病毒表达载体并进行慢病毒包装.实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测结果显示,与BGC-NC组比较,转染LV5-DDR1慢病毒表达载体组的BGC823细胞DDR1表达水平明显升高(P＜0.01).结论 成功构建了DDR1慢病毒表达载体及DDR1稳定过表达的BGC823细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张德奎	兰州大学第二医院消化内科	39	118	6.0	9.0
5	谢瑞霞	兰州大学第二医院消化内科	7	19	3.0	4.0
6	李佩容	兰州大学第二医院消化内科	7	11	2.0	3.0
7	张翠霞	兰州大学第二医院消化内科	6	18	3.0	4.0
8	郭丽芳	兰州大学第二医院消化内科	6	18	3.0	4.0
9	尚琪	兰州大学第二医院消化内科	5	10	2.0	3.0
10	温萌	兰州大学第二医院消化内科	6	18	3.0	4.0