一种高效制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法及应用

• 作者: 刘赪阳 张恩毅 王玉梅 王萌 肖飞 郭健 黄薇
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳酸脱氢酶 基因重组 密码子 参考物质
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 174-179
• 页数: 6页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.02.0029

摘要

[目的]研究高效、廉价制备人乳酸脱氢酶LDH5参考物质的方法.[方法]选取人乳酸脱氢酶基因(LDHA)CDS序列进行分析及优化,合成优化后的基因,克隆至表达载体pRSF-Duet中构建重组乳酸脱氢酶LDH5表达载体.使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)菌株对目的基因进行表达,异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导,镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定酶纯度,BCA法分析酶浓度,全自动生化仪分析酶活性、稳定性.[结果]经优化后的LDHA基因的大肠杆菌密码子适应指数为1;纯化蛋白达到电泳纯,比活性达19.01 U/mg,在4℃及25℃可稳定保存8d.[结论]重组乳酸脱氢酶的表达效率为100 mg/L,酶活性、稳定性、纯度达到临床生化检测的参考物质的条件,可以作为血清乳酸脱氢酶检测的标准物质.