CP4-EPSPS蛋白的模拟胃肠液消化稳定性分析

• 作者: 刘允军 王建华 赵浩含
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 农学
• 关键词: CP4-EPSPS蛋白 消化稳定性 草甘膦 模拟胃液 模拟肠液
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 180-185,204
• 页数: 7页
• 分类号: S481.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.02.0030

摘要

CP4-EPSPS蛋白与草甘膦亲和力低,使草甘膦不能阻断生物体内的莽草酸合成途径,成功用于培育抗草甘膦转基因作物.[目的]为评价CP4-EPSPS蛋白的食用安全性,分析了CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液消化中的稳定性研究.[方法]根据NCBI公布的基因序列信息,人工合成CP4-EPSPS基因并构建原核表达载体pET-CP4,转化大肠杆菌菌株Transetta(DE3)并表达CP4-EPSPS蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白.根据国家标准建立体外模拟胃肠液消化体系,对照和样品蛋白均以5 g/L的浓度进行模拟胃液消化,以2 g/L的浓度进行模拟肠液消化.在消化0 s、15 s、2 min、30 min和60 min后分别进行取样,然后将其进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳,并进行Western Blot杂交分析.[结果]模拟胃肠液消化实验结果表明,CP4-EPSPS蛋白在模拟胃肠液中均在15 s内即被消化,SDS-PAGE与Western Blot杂交未检测到蛋白残留.[结论]说明CP4-EPSPS蛋白在胃肠液体系中极易被消化.