基于高内涵筛选的铜皮石斛促进巨噬细胞吞噬作用评价方法的建立

• 作者: 周旋 周海燕 张海珠 柏兆方 王伽伯 肖小河 赵润怀
• 来源期刊: 药学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞 吞噬作用 大肠杆菌 铜皮石斛
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 药理学
• 页码范围: 737-744
• 页数: 8页
• 分类号: R965
• 语种: 中文
• DOI: 10.16438/j.0513-4870.2016-1133

摘要

探讨采用高内涵筛选技术检测巨噬细胞(RAW264.7)吞噬荧光标记大肠杆菌(GFP-Escherichia coli)方法的灵敏性、稳定性及可靠性,建立中药促进巨噬细胞吞噬活性的高内涵评价方法.对比考察不同的感染复数(multiplicity of infection,MOI)即细菌和细胞比值,以及不同孵育时间对巨噬细胞吞噬细菌能力的影响(吞噬指数=被吞噬的细菌荧光强度/巨噬细胞数),优化高内涵筛选方法和实验参数,并用于测定铜皮石斛对巨噬细胞吞噬作用的影响.结果表明,吞噬指数与MOI值呈正相关,孵育时间在1.5h吞噬指数最高,优化后的条件:细胞数1×104个/孔,孵育时间1.5h,MOI值为50(即细菌数为5×105个/孔),该条件下检测结果的RSD＜ 10％.采用所建立的方法检测铜皮石斛调节巨噬细胞吞噬作用实验的结果显示,在0.31～2.50 g·L-1内铜皮石斛水提液对巨噬细胞吞噬具有剂量依赖的促进作用.本文建立了巨噬细胞吞噬作用评价的高内涵筛选方法,并进一步证明了铜皮石斛水提物促进巨噬细胞的吞噬作用.