高致病性禽流感H5N1NP蛋白与NIK蛋白相互作用初步研究

• 作者: 任洪广 周围 周静 宋婷 岳俊杰 戴红梅 李凯武 梁龙 胡明达 靳远 黄志松
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感 流感病毒A型,H5N1亚型 核蛋白 NF-κB诱导激酶 蛋白质相互作用
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 256-259
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3012字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.04.002

摘要

目的 研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)与NF-κB 诱导激酶(NIK)是否存在蛋白质相互作用,探讨H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.方法 从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的总RNA中经逆转录和PCR获得NIK的全长cDNA双链片段,分别以其和pcDNA3-Flag-NP载体为模板,pCMV-Myc-N和pGEX-4T-1为载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP (GST-NP),并通过免疫共沉淀及GST pull-down实验检测H5N1 NP和NIK之间是否存在相互作用,利用双荧光素酶报告基因系统检测H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.结果 免疫共沉淀及GST pull-down实验表明,构建的真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正确表达,H5N1 NP与NIK之间存在相互作用;报告基因结果显示,H5N1 NP蛋白能明显抑制NIK诱导的NF-κB转录活性.结论 H5N1 NP与NIK之间存在蛋白质相互作用,并抑制NIK诱导的NF-κB转录活性,为进一步研究H5N1的致病机制打下基础.