褐飞虱吞蛋白的基因克隆、多克隆抗体制备及表达定位

• 作者: 俞叶微 俞晓平 安鹏 许益鹏 赵晨星 韩善捷
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 褐飞虱 吞蛋白 基因克隆 多克隆抗体 蛋白定位 卵巢
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 274-285
• 页数: 12页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2017.03.005

摘要

[目的]探析吞蛋白(endophilin)在褐飞虱Nilaparvata lugens生长繁殖过程中的作用.[方法]克隆褐飞虱吞蛋白基因,并进行生物信息学分析;在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达褐飞虱吞蛋白基因,融合蛋白经Ni柱亲和层析法纯化后,免疫新西兰兔子,获得相应的多克隆抗体;将所得的抗体用于检测褐飞虱卵巢中吞蛋白的表达和定位.[结果]克隆得到褐飞虱两个吞蛋白基因endophilin4(EndoA)和endophilin B(EndoB),GenBank登录号分别为KY126096和KY126095,分别编码387个和352个氨基酸,都含有吞蛋白典型的BAR结构域和SH3结构域,但它们在结构上存在差异.ELISA和Western blot检测结果表明,制备的兔抗血清效价达1∶1 000 000,并表现出较好特异性.将获得的抗体应用于免疫荧光实验表明,Endo A和Endo B蛋白在褐飞虱卵巢中普遍表达,在卵巢滤泡细胞的细胞间隙、细胞膜、细胞质中广泛分布,而且与脂类物质的分布模式类似,与正在侵入褐飞虱卵巢的类酵母共生菌共定位.[结论]获得了褐飞虱吞蛋白基因EndoA和EndoB序列,并明确了其生物信息学特征,成功制备了Endo A和Endo B多克隆抗体,分析了Endo A和Endo B在褐飞虱卵巢中的表达情况,认为其可能与褐飞虱卵巢发育和成熟以及类酵母共生菌入侵褐飞虱卵巢有关.这些结果为进一步研究Endo A和Endo B在褐飞虱中的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞晓平	中国计量大学生命科学学院	101	640	14.0	19.0
2	俞叶微	中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	许益鹏	中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室	5	8	2.0	2.0
4	赵晨星	中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室	2	3	1.0	1.0
5	韩善捷	中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室	12	61	4.0	7.0
6	安鹏	中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室	2	2	1.0	1.0