miR-196b海绵吸附慢病毒载体的构建及其在骨髓基质细胞系ST2中的表达

• 作者: 李晓霞 杨威利 王宝利 王珊
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 微RNAs RNA干扰 miR-196b 慢病毒感染 骨髓基质细胞 海绵吸附慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 695-698
• 页数: 4页
• 分类号: R349.64
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20170483

摘要

目的 构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体,为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础.方法 根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物,通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC 19质粒中,再经酶切连接至pLVX-shRNA2慢病毒载体,利用293T细胞将构建成功的miR-196b海绵吸附慢病毒载体进行病毒包装和滴度测定,pLVX-shRNA2慢病毒作为对照组,miR-196b海绵吸附慢病毒作为实验组,将其感染ST2细胞,观察感染效率,并通过Western blotting检测miR-196b靶基因叉头框蛋白O1(FoxO1)的蛋白水平.结果 酶切鉴定和测序结果正确,慢病毒包装所测滴度为1×108 PFU/mL,将其感染靶细胞,其感染效率达80％.Western blotting结果显示,与对照组相比,其靶基因FoxO1蛋白表达水平有明显增加(P＜0.05).结论 成功构建了miR-196b海绵吸附慢病毒载体,并能有效吸附内源性的miR-196b,从而发挥其抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓霞	天津医科大学基础医学院	63	347	8.0	16.0
2	王宝利		43	222	9.0	13.0
8	杨威利	天津医科大学基础医学院	3	2	1.0	1.0
24	王珊	天津医科大学基础医学院	3	1	1.0	1.0