基于骨肉瘤高表达抗原PBF CTL表位改造及鉴定

• 作者: 张建新 时冉冉
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳头瘤病毒结合因子 表位 细胞毒性T淋巴细胞 骨肉瘤
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1993-1999
• 页数: 7页
• 分类号: R738.1|R392.3
• 字数: 5623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2017.11.012

摘要

目的:观察骨肉瘤高表达抗原乳头瘤病毒结合因子(PBF)的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力,开发基于骨肉瘤的多肽免疫治疗.方法:首先运用RT-PCR和Western blot方法检测PBF在骨肉瘤细胞系U2OS和Saos-2的表达情况.然后通过NetCTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取PBF的HLA-A2限制性表位.替换PBF抗原锚定位点氨基酸获得改造肽.候选表位肽的合成方法是标准的Fmoc化学合成法,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分泌干扰素γ(IFN-γ)的能力,乳酸脱氧酶(LDH)释放实验和羧基荧光素琥珀酰亚胺脂(CFSE)细胞毒实验检测候选肽诱导CTL的能力.结果:PBF在骨肉瘤细胞系U2OS和Saos-2均有表达,候选肽P75-1Y2L、P412-1Y、P416-1Y2L9V、P107-1Y和P435-1Y2L具有较好的结合力,且改造肽与HLA-A2的结合力高于原肽.ELIS-POT实验结果显示表位肽P412、P412-1Y、P416、P416-1Y2L9V和P435-1Y2L诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力;P412-1Y和P416-1Y2L9V诱导特异性T细胞免疫分泌的IFN-γ略高于原肽.LDH释放实验和CFSE细胞毒实验结果显示表位P412、P412-1Y、P416和P416-1Y2L9V对U2OS细胞均有一定的杀伤作用,P412-1Y和P416-1Y2L9V特异性CTLs对U2OS细胞杀伤率高于原肽特异性CTLs.结论:PBF抗原改造表位P412-1Y和P416-1Y2L9V与天然表位P412和P416相比有更高的HLA-A2分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且改造肽抗肿瘤免疫效应强于天然表位.P412-1Y和P416-1Y2L9V是优秀的PBF抗原的HLA-A?0201限制性CTL候选表位,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张建新		6	4	1.0	2.0
2	时冉冉		23	31	3.0	5.0