翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析

• 作者: 文春根 程周玉 简少卿 肖俊 胡向萍 胡宝庆 许亮清 阳钢
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 翘嘴鳜(Siniperca chuatsi) 铜锌超氧化物歧化酶 原核表达 蛋白特性
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-17
• 页数: 7页
• 分类号: S917.4
• 字数: 6795字
• 语种: 中文

摘要

超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶.本研究根据翘嘴鳜(Sini-perca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(GenBank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒pET-30a+ScCu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达.经过优化表达条件得到可溶的ScCu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性.结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc-Cu/Zn-SOD的表达.37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在.降低诱导温度和补充Cu2+/Zn2+可提高rScCu/Zn-SOD的表达量.在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO4和0.1 mmol/L ZnCl2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高.纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/mL,酶活力为108.5 U/mg.rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂.本结果可以为研究SOD蛋白特性和功能提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡宝庆	南昌大学生命科学学院	36	172	8.0	10.0
2	文春根	南昌大学生命科学学院	59	230	8.0	11.0
3	简少卿	南昌大学生命科学学院	33	94	6.0	7.0
4	胡向萍	南昌大学生命科学学院	8	45	3.0	6.0
5	肖俊	南昌大学生命科学学院	17	48	4.0	6.0
6	程周玉	南昌大学生命科学学院	3	9	2.0	3.0
7	许亮清	南昌市科学院畜牧水产研究所	1	2	1.0	1.0
8	阳钢	南昌大学生命科学学院	2	5	2.0	2.0