摘要:
目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)所致恶性转化人肝细胞L-02分泌的外泌体微小RNA(miR)-191对正常人肝细胞L-02增殖的影响.方法 分别使用2μmol/L NaAsO2恶性转化L-02细胞的培养液、提取的外泌体,处理正常的野生型L-02细胞(受体L-02细胞);利用转染试剂LipofectamineTM 2000将anti-miR-191和对照anti-miR-NC分别转染至恶性转化L-02(T-b02)细胞,同时设置未处理组.采用实时荧光定量PCR检测miR-191表达;CCK-8法检测细胞增殖.结果 与同代对照L-02细胞培养液(CM)处理组相比,NaAsO2恶性转化细胞培养液(T-CM)处理组显著促进受体L-02细胞增殖[(207±24)%比(105±21)%,t=5.462,P< 0.01]和miR-191表达[(206±25)%比(105±20)%,t=4.116,P<0.05].来源于CM的不同浓度外泌体未引起受体L-02细胞增殖和miR-191表达明显变化(F=2.213、2.213,P均>0.05);来源于T-CM的不同浓度外泌体引起受体L-02细胞增殖和miR-191表达明显增高,且存在一定剂量-效应关系伊=10.910、4]53,P< 0.01或<0.05).20、50 mg/L T-CM来源的外泌体处理的受体L-02细胞相对增殖率高于同浓度CM来源的外泌体处理组[(160±32)%比(102±8)%,(203±7)%比(111±5)%,t=2.999、18.750,P<0.05或<0.01],10、20、50 mg/L T-CM来源的外泌体处理的受体L-02细胞miR-191表达高于同浓度CM来源的外泌体处理组[(166±13)%比(113±9)%,(211±55)%比(102±8)%,(206±31)%比(105±6)%,t=5.611、3.357、5.509,P<0.05或<0.01].anti-miR-191处理组T-L-02细胞及其分泌的外泌体miR-191表达[(39±10)%、(30±19)%]显著低于未处理组和anti-miR-NC处理组[(100±0)%、(106±17)%,(100±0)%、(104±17)%,P均<0.01].未处理组外泌体促进受体L02细胞相对增殖率升高[(395±31)%比(100±0)%,t=16.290,P< 0.01],且miR-191表达显著增高[(208±47)%比(100±0)%,t=4.015,P<0.05];而anti-miR-191处理组外泌体处理受体L-02细胞的相对增殖率和miR-191表达[(157±19)%、(103±44)%]显著低于未处理组和anti-miR-NC处理组[(395±31)%、(411±55)%,(208±47)%、(197±37)%,P< 0.01或<0.05].结论 NaAsO2恶性转化L-02细胞分泌的外泌体miR-191促进正常人肝L-02细胞增殖.