藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达

• 作者: 唐慧琴 张飞燕 李伟 潘康成 王振华 谷笑笑
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 藏猪 胰岛素样生长因子1 原核表达 蛋白纯化 蛋白质印迹法
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 页码范围: 80-85
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S828
• 字数: 5391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.01.013

摘要

旨在克隆藏猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)的成熟肽基因,并进行原核表达的研究.提取藏猪肝脏组织RNA,通过RT-PCR扩增出藏猪IGF-1全长基因,构建重组质粒pMD19-T-IGF-1,以pMD19-T-IGF-1质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽序列并构建成熟肽pET-32α-IGF-1表达质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),对IPTG诱导剂浓度和诱导时间进行优化,Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western Blot对其鉴定.结果显示,IGF-1成熟肽基因(315 bp),成功构建了成熟肽pET-32α-IGF-1原核表达质粒;重组大肠杆菌BL21-IGF-1以包涵体形式表达出分子量约31 kDa融合蛋白,最优IPTG浓度为0.5 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为10 h;纯化获得了高纯度的融合蛋白,经鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白.结果表明,成功构建了表达质粒pET32α-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF-1,表达了藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白及该蛋白具有抗原抗体反应活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘康成	四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心	107	1576	23.0	36.0
2	李伟	四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心	41	240	9.0	14.0
3	王振华		18	109	5.0	10.0
4	张飞燕	四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心	4	9	2.0	3.0
5	唐慧琴	四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心	6	28	3.0	5.0
6	谷笑笑	四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心	6	19	3.0	4.0