酸性普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶在大肠杆菌中分泌表达研究

• 作者: 杨艳坤 栗亚美 白仲虎 陈阿娜
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 工学
• 关键词: 普鲁兰酶 分泌表达 信号肽 发酵优化 培养基添加物 十二烷基磺酸钠
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 23-29
• 页数: 7页
• 分类号: Q786|TQ925
• 字数: 7113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2017.01.023

摘要

来自于酸性普鲁兰芽孢杆菌的普鲁兰酶，由于分子量较大，在大肠杆菌中难以实现高效分泌表达。为研究其在E．coli中高效分泌表达策略，构建了带信号肽的pET－28a（＋）-pelB-pul13A质粒，通过发酵过程控制及向发酵培养基中添加促分泌物质，系统地优化了分泌表达策略。通过分子改造，带信号肽的表达系统实现了低水平的分泌性表达；进一步通过优化培养基、诱导温度、IPTG浓度、诱导时机及11种培养基添加物，促进普鲁兰酶最大限度的分泌到周质空间。实验结果显示，连上pelB信号肽的pull3A在TB／SB培养基中，通过优化的诱导条件（ IPTG浓度0.1 mmol ／L，诱导温度20℃，诱导时机为接种后5 h），在诱导20 h时加入0.03％SDS，周质空间酶活达到最大值102.5 U／mL。在此基础上，探究了化学添加剂对大肠杆菌细胞膜及膜通透性的影响，并应用优化后的系统实现了乙酰胆碱酯酶和单域抗体的分泌表达。为大分子蛋白在大肠杆菌中分泌表达提供参考。