稳定过表达人MGST1基因抑制肺腺癌细胞SPC-A-1的凋亡

• 作者: 付桥粉 宋鑫 张志伟 曾宝真 葛春蕾 黄文华
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺腺癌 微粒体谷胱甘肽S转移酶1 基因克隆 稳定过表达 caspase蛋白 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 608-614
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2|R730.54
• 字数: 4055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2017.06.006

摘要

目的:建立稳定过表达微粒体谷胱甘肽S转移酶1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)基因的市腺癌SPC-A-1细胞系,探讨MGST1在肺腺癌中的作用及其机制.方法:重组质粒pcDNA3-MGST1和空载体pcDNA3以脂质体介导的方法转染至SPC-A-1细胞中,经过G418筛选稳转细胞系,标记为pcDNA3-MGST1细胞和空载体pcDNA3细胞.实时荧光定量PCR及Western blotting鉴定稳转细胞中MGST1 mRNA和蛋白的表达情况.MTS法检测稳转细胞的活力;流式细胞仪和Western blotting检测H2O2诱导下稳转细胞的凋亡率和下游凋亡相关蛋白水平变化.结果:酶切鉴定和测序结果显示pcD-NA3-MGST1重组质粒构建成功,并获得具有G418抗性的稳转细胞株.pcDNA3-MGST1细胞中MGST1在mRNA和蛋白水平表达均显著升高(P＜0.01),且细胞活力明显增加(P＜0.05).H2O2诱导下,pcDNA3-MGST1细胞的早期凋亡率明显低于pcDNA3组[(3.30±0.40)％vs(6.50±0.95)％,P＜0.05];pcDNA3-MGST1细胞凋亡相关蛋白caspase 9、caspase 3、PARP表达增多,cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、cleaved-PARP表达明显减少.结论:本研究成功构建了稳定过表达MGST1的SPC-A-1肺腺癌细胞系,MGST1可能通过调节caspase凋亡通路抑制肺腺癌细胞的凋亡.