CYP2C9基因高表达细胞株对三氯乙烯毒性影响

• 作者: 刘松 廖日炎 徐新云
• 来源期刊: 职业卫生与病伤
• 关键词: 细胞色素氧化酶P450 2C9 三氯乙烯 基因高表达 凋亡基因
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 263-268
• 页数: 6页
• 分类号: R114
• 语种: 中文

摘要

目的 建立细胞色素氧化酶P450 2C9 (CYP2C9)基因高表达肝细胞株(L02),并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 PCR扩增CYP2C9基因并将其克隆到慢病毒表达载体中,然后转染293T细胞,收集病毒上清,感染正常L02细胞.采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9高表达细胞株.分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株染毒24 h,同时设置二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组即0 mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株细胞增殖能力的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化.结果 酶切和测序结果证明CYP2C9基因成功插入PCDH-MCS-EF1-GFP-T2A-PURO载体.CYP2C9高表达细胞株的CYP2C9 mRNA和蛋白相对表达水平分别较对照普通L02细胞升高107.3％和257.9％.TCE染毒后,2.0、4.0、8.0、16.0mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞抑制率与L02细胞相比,低于相同浓度TCE处理的L02细胞.TCE染毒后,通过荧光定量PCR和WB检测,发现TCE 2.0和8.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞的Bcl-2表达水平低于相应染毒剂量组L02细胞,而TCE 0.0、0.5、2.0、8.0 mmol/L剂量组CYP2C9基因高表达细胞的caspase-3表达水平高于普通L02细胞.结论 三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉高表达细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐新云		24	57	4.0	6.0
2	刘松		4	1	1.0	1.0
3	廖日炎		2	2	1.0	1.0