原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响

• 作者: 庄云芳 李学凤 李慧玲 樊婷婷 王爱国 王福金 王靖宇 童仁洋
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝组织 肝癌组织 原代组织培养 成年小鼠
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 26-33
• 页数: 8页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4949字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响.方法 采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平.结果 体外培养6d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好.体外培养6d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团.考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130 ～ 170 kD之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40 ～ 130 kD之间的蛋白条带丰度逐渐增加.Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势.RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化.结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王福金	大连医科大学实验动物中心	51	246	10.0	13.0
2	李慧玲	大连医科大学实验动物中心	26	168	8.0	12.0
3	王靖宇	大连医科大学实验动物中心	61	292	10.0	14.0
4	王爱国	大连医科大学实验动物中心	45	170	7.0	11.0
5	李学凤	大连医科大学实验动物中心	3	3	1.0	1.0
6	庄云芳	大连医科大学实验动物中心	3	1	1.0	1.0
7	樊婷婷	大连医科大学实验动物中心	3	3	1.0	1.0
8	童仁洋	大连医科大学实验动物中心	1	0	0.0	0.0