蛋白芯片检测牛乳β-乳球蛋白条件的优化

• 作者: 孙静 朴玮 李瑾 殷继永 苑晓琳 陈頔 霍军生 马欣欣 黄建
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白芯片 β-乳球蛋白 快速检测
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 78-83
• 分类号: R155.5
• 语种: 中文

摘要

目的 优化蛋白芯片检测β-乳球蛋白(β-Lg)的技术条件.方法 用芯片点样仪将β-乳球蛋白的一种抗体点样于三维基片上,用其另一种抗体作为检测抗体,以Cy3标记的羊抗作为二抗进行检测.以双抗夹心法对β-Lg抗原进行检测.结果 β-Lg单克隆鼠抗66#被确定为点样探针,选择接触式点样进行芯片点样,点样数在42～ 92点之间可出现较好的点样一致性;β-Lg固定探针的浓度选择0.5 mg/mL,其检测抗体的稀释度为1:2000;1％无蛋白封闭液被优选为封闭剂;β-Lg检测下限与生物检测限分别为17.54和55.31 ng/mL.根据β-Lg的S型曲线确定了其线性范围并建立了对β-Lg具有最佳决定系数(R2=0.9993)的回归方程与标准曲线.结论 本研究优化了牛乳中β-Lg检测的蛋白芯片检测条件,建立了定量检测牛乳β-Lg的蛋白芯片平台.