拟南芥DNA去甲基化候选突变体rll2的鉴定与功能分析

• 作者: 孙睿聪 杨柳 杨洁舒 腊红桂
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 拟南芥 DNA去甲基化 RLL2 图位克隆
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1207-1216
• 页数: 10页
• 分类号: S18|Q75
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.08.001

摘要

DNA甲基化是一种比较稳定的表观遗传修饰,已有的研究表明,DNA甲基化修饰对植物的生长、发育和逆境抗性等有至关重要的作用.目前对DNA甲基化产生过程的研究已经比较深入,但是对于DNA去甲基化机理的研究仍比较浅显.为了完善植物DNA去甲基化的分子机制,本研究以包含2×35S:LUC(luciferase)报告基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)转基因系Col-LUC为遗传筛选的起始亲本材料,将此亲本系进行甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变,从自交的M2代群体中筛选到了一株低荧光的突变体,命名为rll2 (reduced LUC luminescence 2),此突变对应的野生型基因因此被命名为RLL2.与高荧光的Col-LUC亲本系相比,rll2突变体荧光强度明显降低.在生长发育方面,rll2突变体表现出明显的发育缺陷,如植株变矮、生长势明显比Col-LUC差.遗传学分析表明,rll2突变体携带一个细胞核单基因隐性突变.图位克隆结果表明,候选基因RLL2定位于5号染色体CL506-B 14M1和CL507-B6M1两个分子标记之间,这两个分子标记分别位于F5O24和T6G21两个细菌人工染色体(bacterial artificialchromosome,BAC)克隆上.酶切-PCR(Chop-PCR)结果表明,rll2突变体中染色体上一些位点的DNA甲基化水平明显升高.反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)结果显示,rll2突变体中,RNA介导的DNA甲基化(RNA-directed DNA methylation,RdDM)途径的几个内源靶基因的表达有不同程度的降低.综上所述,本研究筛选到一株低荧光候选突变体rll2,并初步定位了RLL2基因;实验结果表明,其很可能参与了DNA去甲基化过程.这一研究为深入探索DNA去甲基化的分子机理提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	腊红桂	南京农业大学生命科学学院	4	4	1.0	2.0
2	杨柳	南京农业大学生命科学学院	4	5	2.0	2.0
3	杨洁舒	南京农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	孙睿聪	南京农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0