紫贻贝LC3B蛋白的原核表达及抗血清制备

• 作者: 余振兴 姚翠鸾 朱倩
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 紫贻贝 LC3B 重组表达 细胞自噬 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 页码范围: 498-505
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 5750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20160610454

摘要

LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体.为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索;采用亲和层析对重组蛋白进行纯化,并采用SDS-PAGE检测及Western blot进行验证;利用获得的重组蛋白免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体.结果显示,在20℃,转速为150 r/min条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导表达10h后,可以得到高表达量、可溶性的重组MgLC3B-His融合蛋白,亲和层析纯化后,获得单一条带的MgLC3B-His可溶性重组蛋白;采用纯化后的MgLC3B-His融合蛋白对新西兰兔进行多次免疫,采集分离兔抗血清并利用proteinA纯化,获得紫贻贝的LC3B多克隆抗体,效价为25 600.紫贻贝LC3B多克隆抗体的成功制备,为今后深入开展紫贻贝及相近物种的细胞自噬研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚翠鸾	集美大学水产学院	12	202	6.0	12.0
2	余振兴	集美大学水产学院	1	0	0.0	0.0
3	朱倩	集美大学水产学院	1	0	0.0	0.0