新型猪胃蛋白酶原突变体真核表达体系构建

• 作者: 刘宇 梁兴国 武燕月 董平 郑屿佳 郭辉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪胃蛋白酶 定点突变 酵母表达体系 高表达转化子
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 205-210
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.03.0034

摘要

[目的]构建4种新型猪胃蛋白酶原突变体真核表达体系.[方法]以含有猪胃蛋白酶原基因的环状质粒pPICZαA-PGA为模板,对猪胃蛋白酶活性关键氨基酸Asp32和Asp215相关的S35、G76、T216和T218 4个位点定点突变;突变质粒鉴定后电转化至毕赤酵母X-33;qPCR鉴定高mRNA表达转化子;以甲醇诱导表达4d后SDS-PAGE及酶活测定检测目的蛋白.[结果]成功构建4种新型猪胃蛋白酶原突变体mPG-S35A、mPG-G76A、mPG-T216A和mPG-T 218A;阳性克隆率超过90％;SDS-PAGE检测到清晰的目的蛋白条带,分子量约为48 kDa,4种突变体的酶活分别是11.3 U/mL、22.6 U/mL、16.9 U/mL、13.7 U/mL.[结论]SDS-PAGE检测到4种分子量48 kDa的突变猪胃蛋白酶原清晰条带,四者酶活在11.3～ 22.6 U/mL之间,成功构建4种新型猪胃蛋白酶原突变体在毕赤酵母以外分泌表达的体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董平		44	442	13.0	20.0
2	刘宇		13	102	6.0	10.0
3	梁兴国		30	82	5.0	8.0
4	郭辉		3	3	1.0	1.0
5	郑屿佳		1	0	0.0	0.0
6	武燕月		1	0	0.0	0.0