梭子蟹肌孢虫SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 周俊芳 房文红 李新苍 王元 赵姝 陈甜甜
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 梭子蟹肌孢虫 三疣梭子蟹 实时定量PCR方法 SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-29
• 页数: 8页
• 分类号: S945
• 字数: 5747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2017.06.003

摘要

梭子蟹肌孢虫(Ameson portunus)是感染三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的常见病原之一,该研究以其SSU rRNA基因为靶标建立了SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法.结果显示:该方法扩增效率为101.45％,检测灵敏度下限可达2.0×101拷贝·μL-1,特异性、组内重复性和组间重复性均好.利用该荧光定量PCR方法对一批来自“牙膏病”流行区的养殖三疣梭子蟹样品进行检测,梭子蟹肌孢虫检出率为82.35％.检测结果显示,活蟹的每毫克肌肉平均带虫量大幅低于死蟹,表明该地区梭子蟹的死亡与肌孢虫的感染密切相关,而且,当梭子蟹肌孢虫载量达到1.0×109拷贝·mg-1时三疣梭子蟹存在暴发疾病甚至死亡的风险.另外,通过对比检测发现,梭子蟹肌孢虫套式PCR方法对这批样品的检出率为64.71％,表明该研究建立的荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度.