大西洋鲑鱼Ⅳ型抗冻蛋白的表达与纯化

• 作者: 安虹霏 张秋爽 王常丽 陈莹 马宏达
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗冻蛋白 Ⅳ型抗冻蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 218-222
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.03.0036

摘要

[目的]构建Ⅳ型抗冻蛋白(AFPⅣ)大肠杆菌表达系统,纯化诱导表达的可溶性AFPⅣ,并进行质谱鉴定.[方法]构建pET22b-His6-AFPⅣ重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并优化IPTG诱导条件,通过亲和层析进行分离纯化,收集样品并冻干保存,对Ⅳ型抗冻蛋白样品进行质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定.[结果]构建了pET22b-His6-AFPⅣ重组质粒,IPTG诱导表达产生可溶性AFPⅣ,且最佳诱导浓度为0.2 mmol/L,诱导时间4h,纯化后AFPⅣ浓度为136 μg/ml.[结论]成功构建了AFPⅣ原核表达系统,优化了IPTG诱导条件,重组AFPⅣ得到纯化,并获得冻干样品5 mg,经质谱鉴定确认为AFPⅣ.