人线粒体转录终止因子2在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 余敏 孙美涛 张晓娟 杨勇琴 梅雯 熊伟 自加吉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 线粒体转录终止因子2 原核表达载体 多克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 232-238,263
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.03.0038

摘要

[目的]构建人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)基因原核表达载体并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli Rosetta细胞中表达目的蛋白质,制备及鉴定鼠抗人MTERF2多克隆抗体.[方法]利用RT-PCR技术从HeLa细胞中扩增出人MTERF2基因cDNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,将目的基因插入pET-28b原核表达载体中,转化大肠杆菌Rosseta细胞,IPTG诱导人MTERF2融合蛋白质的表达,经包涵体的洗涤、亲和层析法纯化、质谱鉴定后,用纯化出的包涵体蛋白免疫BALB/c小鼠制备鼠抗人MTERF2多克隆抗体.用酶联免疫吸附法检测抗体的效价,Western Blot检测抗体的特异性.[结果]构建了含有人MTERF2基因cD-NA ORF序列的原核表达载体pET-28b-hMTERF2,并成功制备高质量的鼠抗人MTERF2多克隆抗体.酶联免疫吸附法分析结果显示抗体的效价约为1:10 240,Western Blot检测结果显示鼠抗人MTERF2多克隆抗体能识别原核表达的人MTERF2蛋白以及HeLa、U251细胞内源的人MTERF2蛋白.[结论]在大肠杆菌细胞成功地表达人MTERF2蛋白,制备的鼠抗人MTERF2多克隆抗体具有高效价和高特异性,为进一步研究人MTERF2蛋白的功能提供了基础.