靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选

• 作者: 宁启兰 温玉荣 罗思羽 郑芳 韩燕
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: Vsig4 纳米抗体 噬菌体展示文库 生物淘筛 亲和力鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201701002

摘要

目的：构建 V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体，以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用 Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫，分离血液中的淋巴细胞，利用噬菌体展示技术，构建噬菌体展示文库，经过连续3次生物淘筛获得与 Vsig4蛋白结合的噬菌体，经测序和基因比对所得 VHH 序列，用 ELISA法筛选出抗 Vsig4的高亲和力纳米抗体，并用 Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库，经过克隆筛选获得136个 Vsig4阳性单克隆，经测序获得15个不同的VHH 基因，将这些基因克隆至原核表达体系，表达和纯化后获得了高纯度的 Vsig4纳米抗体，其中 Nb119的亲和力最高，并且可以与 Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的 Vsig4纳米抗体，以期用于检测巨噬细胞表面 Vsig4的表达和构建特异性分子探针。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩燕	西安交通大学医学部基础医学院西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室	24	127	6.0	10.0
2	宁启兰	西安交通大学医学部基础医学院西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室	23	81	5.0	8.0
3	郑芳	西安交通大学医学部基础医学院西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室	8	52	3.0	7.0
4	罗思羽	西安交通大学医学部基础医学院西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室	2	8	1.0	2.0