家蝇几丁质酶基因MDCⅡ重组表达质粒的构建及表达模式研究

• 作者: 付萍 吴沁怡 国果 张勇 李妍 杨尉锦
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 家蝇 几丁质酶 克隆 表达模式
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 102-108
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.02.015

摘要

从家蝇EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因MDCⅡ,对该基因进行克隆及分子特性分析,探讨其在家蝇不同组织、不同发育时期及经不同微生物诱导后的时空表达模式.利用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库筛选出MDCⅡ基因,运用生物信息学方法分析该基因序列及其编码蛋白的理化特性,采用邻接法构建系统进化树;PCR技术扩增目的基因,构建pEASY-E1-MDCⅡ重组质粒,转化到Trans1-T1克隆感受态细胞中;采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)技术,检测MDCⅡ基因在不同发育时期和不同组织部位的表达差异;采用注射法将不同微生物导入到家蝇3龄幼虫体内,Real Time PCR检测诱导后不同时间点MDCⅡ基因表达水平的变化.结果显示,MDCⅡ基因的ORF框全长1 374 bp,编码457个氨基酸,理论分子量51.6 kD,进化树分析比对与果蝇成虫盘生长因子的遗传距离较近.构建了具有正确基因序列的pEASY-E1-MDCⅡ重组质粒.MDCⅡ基因在家蝇不同发育阶段中均有不同程度的表达,在3龄幼虫中,以唾液腺和脂肪体中的表达水平较高;在白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导后3h,MDCⅡ基因均强现明显的表达上调.MDCⅡ基因属于几丁质酶中成虫盘生长因子,参与了家蝇的生长发育,在免疫防御过程中也发挥了一定作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	国果		14	11	2.0	3.0
2	杨尉锦		2	4	1.0	2.0
3	张勇		8	5	1.0	2.0
4	付萍		4	9	2.0	3.0
5	李妍		3	5	1.0	2.0
6	吴沁怡	贵州医科大学附属医院肿瘤生物治疗中心	1	4	1.0	1.0