用体外表达的血小板膜蛋白GPⅢa偶联Luminex微球检测HPA-1a抗体

• 作者: 何吉 刘瑛 和艳敏 应燕玲 朱发明 陶苏丹
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: Luminex微球技术 GPⅢa体外重组表达 抗HPA-1a
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 40-44
• 页数: 5页
• 字数: 4069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2017.01.009

摘要

目的 拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA-1a抗原与Luminex xMAP微球相连,建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA-1a的效果.方法 扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢癌细胞株.利用G418筛选稳定表达细胞株,体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa.将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联,再利用偶联后的微球与待测血清反应.利用PE-抗人IgG进行显色,在Luminex-100仪上读取数据并判断结果.结果 ITGB3基因测序为HPA-1aa,将克隆后的GPⅢa重组蛋白偶联Luminex xMAP微球,Luminex微球法检测HPA 1a抗体的灵敏度为滴度1/32(抗体浓度3.125 U/mL).微球技术能特异性鉴别出待测样本的HPA-1a抗体,与MAIPA结果一致,而且与HLA抗体、ABO抗体以及其他HPA血小板系统抗体(HPA-3a、HPA-5b)均不发生交叉反应,说明建用立的Luminex微球技术来检测血小板抗体是可行的.结论 成功获取了重组表达的血小板膜蛋白GPⅢa,并初步建立了Luminex微球检测HPA-1a抗体方法.