过表达B7-H6在自然杀伤细胞介导的肝细胞凋亡中的作用

• 作者: 廖思红 林东军 林哲生 袁青 邹勇 陈玉婵
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7同源物6 真核表达载体 自然杀伤细胞 肝细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 2095-2098
• 页数: 4页
• 分类号: R329.21|R575.1
• 字数: 2752字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2017.11.028

摘要

目的:探讨过表达B7同源物6(B7-H6)在自然杀伤(NK)细胞介导的肝细胞凋亡中的作用.方法:设计针对B7-H6全长的寡核苷酸引物,经PCR扩增调取B7-H6全长,并将其亚克隆入线性化的真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组B7-H6过表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6,通过双酶切、PCR及测序进行鉴定.利用脂质体将pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒转染正常肝细胞系L02,采用荧光显微镜观察EGFP的表达,流式细胞技术检测转染效率,qRT-PCR 和Western blot 检测B7-H6 mRNA 和蛋白的表达水平.将转染pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒的L02细胞与NK-92细胞以不同的效靶比共培养,利用CCK-8实验分析检测NK-92细胞对L02细胞的杀伤效应.结果:经PCR、酶切及测序等方法证实成功构建pIRES2-EGFP-B7-H6过表达载体;经脂质体转染L02细胞48h后,在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达,流式检测显示转染效率达到92.6%;qRT-PCR和Western blot结果显示L02细胞B7-H6的mRNA和蛋白高表达;CCK-8实验证实相对于转染空载体pIRES2-EGFP,NK-92细胞对转染了pIRES2-EGFP-B7-H6的L02细胞的杀伤活性显著增强(P<0.05).结论:成功构建过表达B7-H6的真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6,并进一步证实NK-92细胞对过表达B7-H6的L02细胞具有显著的杀伤效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林东军	中山大学附属第三医院输血科	84	277	8.0	13.0
5	林哲生	中山大学附属第三医院输血科	7	14	2.0	3.0
6	邹勇	中山大学附属第三医院输血科	28	67	5.0	5.0
7	陈玉婵	中山大学附属第三医院输血科	6	17	2.0	4.0
8	廖思红	中山大学附属第三医院输血科	19	54	5.0	6.0
9	袁青	中山大学附属第三医院输血科	20	49	4.0	5.0