猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白磷酸化位点鉴定及其作用研究

• 作者: 刘欢 周艳君 姜一峰 张文超 杨莘 童光志 虞凌雪 高飞 黄勤锋
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRRSV N蛋白 磷酸化 转录调控
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 518-523,555
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0425.2017.07.02

摘要

为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白磷酸化对于病毒复制和转录的影响,本研究利用Phos-tag和点突变技术实现了N蛋白磷酸化形式的分离并鉴定出磷酸化位点为第120位丝氨酸(Ser120).通过反向遗传操作系统将N蛋白的磷酸化位点突变并拯救出病毒.空斑实验、IFA检测、病毒生长曲线结果显示,磷酸化位点突变对于病毒的感染性和N蛋白的核定位没有影响,但是病毒的复制能力减弱.进一步利用荧光定量RT-PCR方法检测突变病毒与亲本病毒在不同感染时间的基因组RNA和亚基因组RNA的转录水平,结果表明突变病毒的gRNA和长链sgRNAs转录水平明显低于亲本病毒,表明N蛋白Ser120磷酸化可能参与了病毒的转录调控过程.