三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架中大鼠神经干细胞的生长和分化情况

• 作者: 张赛 李晓红 涂悦 王丽娜 王景景 符锋 赵明亮 陈翀
• 来源期刊: 中国医药
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 生物支架 胶原蛋白 壳聚糖 三维打印
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 442-446
• 页数: 5页
• 分类号: R741
• 字数: 5357字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4777.2017.03.029

摘要

目的 观察三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架中大鼠神经干细胞(NSCs)生长和分化情况.方法 取妊娠14～ 16 d的SD大鼠胚胎大脑皮质,分离培养和鉴定大鼠NSCs.采用低温三维打印联合冷冻干燥技术制备胶原蛋白-壳聚糖复合生物支架,将NSCs移植入三维支架共培养,并将常规悬浮培养NSCs为对照组(3组,每组5个复孔),三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架共培养的NSCs为观察组(3组,每组5个复孔),使用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的生长状况.分别采用细胞计数试剂盒和免疫荧光法检测NSCs的吸光度值和分化情况.结果 NSCs培养第3代神经球中免疫荧光检测提示Nestin蛋白表达阳性,诱导7d后NSCs的免疫荧光检测提示神经元特异性核蛋白(NeuN)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性.三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架为三维多孔立体结构,四边形孔径为(510±63)μm.显微镜及扫描电镜观察结果显示NSCs可在支架中很好地生长、分化.观察组共培养1、4、7、11、14 d吸光度值均高于对照组[(0.34±0.04)比(0.21 ±0.03)、(0.70±0.08)比(0.35±0.04)、(0.92±0.11)比(0.67±0.08)、(0.75±0.09)比(0.42±0.05)、(0.53±0.07)比(0.27±0.03)],差异均有统计学意义(均P ＜0.05).三维打印胶原蛋白-壳聚糖复合支架周围和内部存在NeuN和GFAP阳性细胞.结论 三维打印技术可制备微观结构可控的胶原蛋白-壳聚糖复合支架,且具有良好的生物相容性,适宜NSCs生长和分化.