禽致病性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2EivC点突变的构建及其ATPase活性分析

• 作者: 丁铲 于圣青 刘新 吴晓君 梁华 王少辉 王栋 王桂军 许漩 黄彩兰
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽致病性大肠杆菌 Ⅲ型分泌系统2 eivC基因 ATPase
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 47-53
• 页数: 7页
• 分类号: S852.612
• 字数: 3724字
• 语种: 中文

摘要

为了分析禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenicEscherichia coli,APEC)Ⅲ型分泌系统2(E.coli TypeⅢsecretion system 2,ETT2)EivC ATPase关键活性位点,本研究通过比对分析病原菌ATPase序列,筛选APEC ETT2 EivC的关键位点.然后设计点突变引物,通过PCR方法构建EivC点突变片段,构建EivC点突变重组表达质粒.经IPTG诱导表达后纯化相应蛋白,并检测其ATPase活性.结果显示,EivC蛋白包含F0F1 ATPase的保守序列,且具有ATPase活性.测序结果显示EivC第175、199、201、233位氨基酸突变成功,融合蛋白获得成功表达与纯化.然而,点突变与野生型EivC的ATPase活性差异不具有显著统计学意义.本研究结果表明第175、199、201、233位氨基酸不影响EivC的ATPase活性.