次乌头碱配伍甘草次酸对缺氧缺糖损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其分子机制

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 医学
• 关键词: 次乌头碱 甘草次酸 H9c2心肌细胞 凋亡 PI3K/Akt
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 页码范围: 586-596
• 页数: 11页
• 分类号: R961.1
• 语种: 英文

摘要

目的:探讨次乌头碱(HA)配伍甘草次酸(GA)对缺氧缺糖(OGD)损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其作用机制.创新点:首次在OGD模型中证明HA+GA对H9c2心肌细胞有明显的保护作用.此作用与减少细胞坏死和凋亡有关系,且其作用机制与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白质丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路有关.方法:采用H9c2心肌细胞为研究对象,将其分为七组:正常组、OGD模型组、OGD+HA组、OGD+GA组、OGD+HA+GA组、OGD+LY294002组、OGD+HA+GA+LY294002组.采用Hoechst 33342染色荧光显微镜及透射电镜观察前五组的H9c2心肌细胞的形态学改变;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前五组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量的改变;采用异硫氰酸荧光素-磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(FITC-AV/PI)双染色法检测前五组细胞凋亡率的情况;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测加入抑制剂LY294002前后丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)等细胞作用信号通路PI3K/Akt相关蛋白的情况.结论:(1)Hoechst 33342染色荧光显微镜显示OGD+HA+GA组抗凋亡作用最明显;(2)透射电镜观察OGD+HA+GA组凋亡现象改善最多;(3)LDH、CK-MB及AST的含量变化显示OGD+HA+GA组心肌细胞损伤指标降低最多(P<0.05);(4)Western blot法检测结果显示HA+GA可以减少OGD对H9c2心肌细胞的损伤,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关.