康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅡ基因与乳酸菌非抗性穿梭表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘燕 孙哲 张宏福 杨琳 王瑞军
• 来源期刊: 饲料工业
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤维素酶 CBHⅡ基因 大肠杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2017,（14）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 47-51
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.13302/j.cnki.fi.2017.14.011

摘要

以康宁木霉AS3.2774 mRNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增了1413 bp的CBHⅡ全长基因,利用T-A克隆,将CBHⅡ克隆至克隆载体pMD 18-T SimpleVector,构建质粒pMD 18-T-CBHⅡ.以SmaⅠ和SphⅠ双酶切pMD18-T-CBHⅡ和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,将纯化的CBHⅡ亚克隆到pW425t中,得到原核表达重组质粒pW425t-CBHⅡ,可在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达.将pW425t-CBHⅡ转化在thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13中,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定、分析测序以及生长功能弥补筛选阳性克隆.SDS-PAGE分析,约49.6 kD的蛋白可见,刚果红染色显示重组大肠杆菌可产生明显的水解圈,并用pNPC法测得重组大肠杆菌的CBHⅡ酶活力在温度50℃、pH值5.0时达到最大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨琳	华南农业大学动物科技学院	89	642	13.0	20.0
2	孙哲	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室	27	324	10.0	17.0
3	张宏福	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室	186	2111	25.0	36.0
4	刘燕	内蒙古农业大学职业技术学院	39	289	10.0	16.0
5	王瑞军	内蒙古农业大学动物科学学院	37	76	6.0	7.0