水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达

• 作者: 丁新伦 吴祖建 吴锦鸿 张洁 朱重庆 陈晓敏
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻齿叶矮缩病毒 水稻原生质体 Pns10抗体 Pns10RNA Pns10蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 232-237
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|S435.111.4+9
• 字数: 3977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16819/j.1001-7216.2017.6148

摘要

[目的]水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体,是RRSV侵染介体所必需.然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道.[方法]利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;通过水稻原生质体病毒侵染体系,利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况,利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况.[结果]将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体pDEST17中,IPTG诱导表达成功后,制备融合蛋白抗血清.Western blot检测显示,该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白.病毒侵染水稻原生质体后,Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体;Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累,24 h后达到最大值,随后开始下降;Pns10蛋白在24 h后开始表达,之后维持较高水平,60 h后略有下降.[结论]成功获得了Pns10抗血清;Pns10在水稻原生质体内成功表达,可形成类似病毒原质的内含体,并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达.