甘薯TD-SSR-PCR反应体系的优化

• 作者: 南文卓 张小贝 朱国鹏 郑丹炜
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘薯 TD-SSR-PCR 正交设计 2×PCR Mix 最佳上样量
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: Q945
• 字数: 3375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.01.016

摘要

为探索甘薯最佳TD-SSR-PCR体系,利用L16(43)正交设计研究2×PCR Mix、引物、模板DNA等主要影响因素的适宜浓度,并在此基础上对扩增程序和聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量进行优化.结果表明,优化后的TD-SSR-PCR反应体系包括:10 μL 2×PCR Mix、100 ng模板DNA、0.4 μmol/L引物,1μL甘油,总体积20 μL;优化后的扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性45 s、Tm+5℃～Tm-5℃(每循环退火温度下降0.5℃,‰选用一对引物中的较小‰值)退火30 s(退火时间因扩增片段大小而异)、72℃延伸1min共20个循环,94℃变性45 s、Tm-5℃退火30 s、72℃延伸1 min共15个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存;聚丙烯酰胺电泳上样量以1.5～2 μL为宜.在此条件下,利用引物Z37对10份甘薯材料进行PCR扩增,得到的条带清晰、多态性高,表明此条件适用于甘薯的TD-SSR-PCR反应体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱国鹏	海南大学园艺园林学院	48	206	8.0	12.0
2	南文卓	海南大学园艺园林学院	4	15	2.0	3.0
3	郑丹炜	海南大学园艺园林学院	1	4	1.0	1.0
4	张小贝	海南大学园艺园林学院	2	13	2.0	2.0