栽培种花生AFLP标记体系的优化及多态性引物筛选

• 作者: GETAHUN Addisu 刘立峰 崔顺立 李自超 杨鑫雷 王亮 穆国俊
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 花生 AFLP标记 限制性核酸内切酶 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 2087-2095
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2017.11.2087

摘要

为建立并优化适合花生的EcoRI和Mse I内切酶组合的AFLP标记技术体系,本试验对花生基因组DNA大样提取方法、双酶切反应、连接体系、预扩增和选择性扩增等影响因素进行反复调试与优化,并对适合花生AFLP分析的引物组合(E/M)进行多态性筛选.结果表明,高质量的模板DNA提取采用改进的SDS-CTAB法,DNA样品的浓度在150～200 ng·μL-1,37℃双酶切3.0h,接头浓度为50pmol·μL-1,T4-DNA连接酶浓度为10 U·μL-1,16℃连接10 h.以2×Es Taq MasterMix(含有Es Taq DNA Polymerase,3 mmol·L-1 MgCl2和400 μmol·L-1 dNTP)作为PCR反应原料,其中,预扩增反应体系为50 μL,预扩增引物(E00和M00)的浓度为50 ng·μL-1,预扩增产物最适稀释倍数为20倍;选择性扩增反应体系为20μL,扩增产物中加入10 μL Loading Buffer,经95℃变性10 min后,立刻转移到冰浴中冷却备用.最终,从225对AFLP引物组合中,筛选出稳定且多态性丰富的42对引物组合,可用于后期作图群体基因型检测和种质资源遗传多样性分析.本研究结果为下一步构建花生高密度遗传连锁图谱和开展分子标记辅助育种奠定了基础.