实时定量PCR检测新生儿全血中肺炎克雷伯菌方法的建立和应用

• 作者: 宋婕 封志纯 庄璐 张玉佩 朱丽敏 李秋平 王瑞娟 章晟 赵丹华
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时定量PCR 新生儿 肺炎克雷伯菌 血标本
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 665-670
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.05.019

摘要

目的:建立实时定量PCR(RQ-PCR)快速检测新生儿血液标本中肺炎克雷伯菌基因组DNA的方法,并进行初步临床应用.方法:选择肺炎克雷伯菌高度保守的二鸟苷酸环化酶基因作为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针,建立RQ-PCR反应体系;采用含靶基因扩增片段的重组质粒建立标准曲线,提取血液中的基因组DNA,对500份新生儿血液标本进行RQ-PCR检测.结果:设计的引物和探针特异性高,检测限为1个拷贝数;500份新生儿血液标本中,RQ-PCR检测为阳性的有18个病例,阳性率为3.6％,明显高于血培养的阳性率2.4％(12个病例),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:RQ-PCR可用于检测新生儿血液标本中的肺炎克雷伯菌,此方法快速、灵敏、特异性强.