蜡样芽胞杆菌磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中重组表达、纯化及酶学性质分析

• 作者: 张梁 李颜颜 杨盛荣 肖超 辛瑜 陈国安
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 蜡样芽胞杆菌 乳酸克鲁维酵母 重组表达 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 87-96
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20160189

摘要

[目的]构建蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析.[方法]以B.cereus基因组DNA为模板,PCR扩增得到磷脂酶C基因(bcplc),构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒并转化到乳酸克鲁维酵母中,实现bcplc基因的表达.利用镍柱亲和层析纯化和脱盐柱得到电泳纯的重组磷脂酶C(rbcPLC).[结果]成功构建产磷脂酶C的重组乳酸克鲁维酵母并纯化了重组磷脂酶C,纯化后rbcPLC经SDS-PAGE分析在40 kDa附近出现显性条带.NPPC法测得rbcPLC酶活为19251 U/mg,最适反应温度为80C,最适pH为9.0.在低于40C时,pH 7.0-8.0时,rbcPLC重组酶较稳定.Cu2+和C02+对其有明显的抑制作用;Zn2+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对其有明显的促进作用.[结论]首次实现了对蜡样芽胞杆菌来源的磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了借鉴意义.