人脂肪组织细胞外基质支架的制备与检测

• 作者: 刘毅 田亚菲
• 来源期刊: 中华整形外科杂志
• 关键词: 细胞外基质 支架 干细胞 组织工程
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 129-135
• 页数: 7页
• 字数: 6067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-4598.2017.02.011

摘要

目的 制备人脂肪组织细胞外基质支架并初步检测其脱细胞效果、成分、机械性能、细胞相容性等指标,为脂肪组织工程寻找理想的支架材料.方法 取正常脂肪组织25 g经反复冻融、酶消化、有机溶剂提取脂质、冷冻干燥等处理,制备成人脂肪组织细胞外基质支架.大体观察支架性状,行HE染色、Masson染色、DAPI荧光染色观察支架脱细胞效果;免疫组织化学染色检测细胞外基质(Ⅳ型胶原、层粘连蛋白)保留情况;扫描电镜观察支架显微结构;万能力学试验机测试支架机械性能;利用酶消化法提取人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs),取第3代细胞与人脂肪组织细胞外基质支架复合培养,检测细胞相容性,CCK8检测细胞增殖活性,扫描电镜观察细胞黏附情况并成脂诱导,14 d后行细胞-支架复合物冰冻切片,油红O染色,观察细胞成脂分化情况.结果 脂肪组织细胞外基质支架呈海绵网状结构;脱细胞较为彻底,细胞外基质成分Ⅳ型胶原及层粘连蛋白保留较为完好,机械性能较正常有所下降.支架与hADSCs复合培养,细胞在支架上增殖、黏附、分化良好.结论 所制备的人脂肪组织细胞外基质支架保留了较完整的细胞外基质成分,细胞相容性好,是脂肪组织工程理想的支架材料.