类泛素蛋白FAT10对人肾上皮细胞α-烯醇酶共价修饰的初步研究

• 作者: 冷泠 季守平 陈圳川
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: α-烯醇酶(ENO1) 人白细胞抗原F相关转录物10(FAT10) 真核表达 共价修饰
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 614-617
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.05.008

摘要

目的:构建带Flag标签的α-烯醇酶(ENO1)基因以及带Myc标签的人白细胞抗原F相关转录物10(FAT10)基因的真核表达质粒载体,鉴定ENO1和FAT10在人肾上皮细胞株HEK293中的表达,检测类泛素蛋白FAT10是否共价修饰ENO1.方法:以人宫颈癌细胞系HeLa的cDNA为模板进行PCR,得到enol目的片段,与分别经EcoRV和SalⅠ酶切的pFlag-CMV载体连接得到重组质粒pFlag-CMV-eno1并进行鉴定测序;以人脑组织cDNA文库为模板进行PCR,得到fat10目的片段,与分别经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切的pCMV-Myc载体连接得到重组质粒pCMV-Myc-fat 10并进行鉴定并测序.将重组质粒用脂质体法转染HEK293细胞,用Western印迹检测ENO1和FAT10蛋白的表达.将重组质粒共转染HEK293细胞,用免疫共沉淀检测FAT10对ENO1的修饰情况.结果:重组克隆载体内的eno1和fat10序列与GenBank报告的序列完全一致;转染HEK293细胞后,ENO1和FAT10蛋白过表达;FAT10能够共价修饰ENO1.结论:类泛素蛋白FAT10共价修饰ENO1,为肿瘤的发生、发展及迁移的研究提供了新的研究思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季守平	军事医学科学院野战输血研究所组织工程研究室	41	231	8.0	13.0
2	陈圳川	军事医学科学院野战输血研究所组织工程研究室	2	2	1.0	1.0
3	冷泠	军事医学科学院野战输血研究所组织工程研究室	2	2	1.0	1.0