猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

• 作者: 丁耀忠 张杰 张永光 欧云文 贾宁 马小元
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 猪细小病毒1型 VP2基因 原核表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 169-174
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.03.024

摘要

旨在研究猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白(第155-439位氨基酸)的抗原性,为开发PPV1的检测方法奠定基础.以PPV1型AV31株的DNA为模板,扩增获得849 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PPV1-VP2(155-439 aa)重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3);在37℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性.SDS-PAGE分析表明,该VP2编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为39 kD;Western blot检测结果表明,该重组蛋白与PPV1阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PCV2阳性血清不发生交叉反应.该实验成功构建了PPV1-VP2(155-439 aa)原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性.