人G3BP1真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的定位分析

• 作者: 张丽娜 黄映辉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白Ⅰ(G3BP1) EC109细胞 细胞定位 应激颗粒(SGs)
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 623-628
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q24
• 字数: 4049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.05.010

摘要

目的:构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)的真核表达载体pEGFP-C3-G3BP1,并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位.方法:采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 cDNA全长序列,用限制性内切酶HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体,转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,经双酶切及测序鉴定;将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达,荧光显微镜观察G3BP1的定位.结果:目的基因G3BP1的序列完全正确,并在EC109细胞中获得表达,荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质.结论:构建了pEGFP-C3-G3BP1真核表达载体,并在EC109细胞中过表达,G3BP1蛋白定位于细胞质,形成应激颗粒(stress granules,SGs).为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄映辉	北京工业大学生命科学与生物工程学院	14	3	1.0	1.0
2	张丽娜	北京工业大学生命科学与生物工程学院	8	134	3.0	8.0